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辣根过氧化物酶提取纯化及其应用

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辣根提取过氧化物酶:辣根过氧化物酶(HRP)为黄色纤维状松软物,是酶工业中使用比较普遍的酶种 之一,属于血红素蛋白酶,广泛分布于植物体中,以十字科的鲜辣根含量最高。 辣根过氧化物酶是一种生化研究用酶,既可用于定位检测,又能用于定量测定。


辣根过氧化物酶的邻苯二胺底物配制方法。辣根过氧化物酶的邻苯二胺底物配制方法:首先将10-100毫克邻苯二胺溶于100微升N,N-二甲基甲酰胺中,形成A液,含有双氧水的柠檬酸-磷酸盐的底物缓冲液为B液,使用时,将5微升A液与10毫升B液混合后即可使用。本发明主要针对辣根过氧化物酶底物邻苯二胺的底物配方作一些改进,解决邻苯二胺的精确称量的烦琐问题、邻苯二胺在底物缓冲液中不易溶解问题、邻苯二胺小量保存的稳定性以及底物缓冲体系的操作方便等问题。并且这种改进不能破坏原先的辣根过氧化物酶底物系统的灵敏性,也不破坏该系统的分析测试等相关内容。


辣根过氧化物酶基因与血管内皮生长因子基因的连接及克隆:一种具有杀伤肿瘤细胞作用的融合蛋白质的基因制备。本发明构建了一种靶向性融合蛋白的重组基因,其中有人血管内皮生长因子基因、辣根过氧化物酶基因及中间的连接肽DNA序列。该融合蛋白质的基因的制备方法包括:1)分别获得血管内皮细胞生长因子基因与辣根过氧化物酶基因;2)将二者通过小分子连接肽基因进行连接;2)连接到毕赤酵母的表达载体pPIC9K上;4)将所连接成的重组载体在大肠杆菌中进行克隆。本发明重组基因可用于表达具有肿瘤细胞杀伤作用的融合蛋白质。


辣根过氧化物酶纳米高分子生物催化颗粒及其制备方法,属于酶的化学修饰领域。本发明公开了一种具有核壳结构的纳米高分子生物催化颗粒,核心是辣根过氧化物酶,外壳是交联的高分子材料,核壳之间有化学键连接,具有生物催化氧化活性高、热稳定性强、耐有机溶剂性能强的特点,在免疫测定、有机合成、生物修复等领域具有广泛的应用前景。本发明还公开了上述颗粒的制备方法,即先在辣根过氧化物酶表面通过酶修饰剂引入碳碳双键基团,然后以含有碳碳双键的烯基单体为原料,通过自由基聚合得到。该方法具有简单温和、粒径纳米尺度高度可控、易于工业实施放大的特点。


光固定化辣根过氧化物酶电极的制备及其应用方法。将聚丙烯酸酯预聚体0.5~2质量份溶解于100质量份有机溶剂中,再与辣根过氧化物酶溶液混合制得混合溶液,将此混合溶液滴涂在电极基底表面,在常温下可见光照射0.1h~3h使聚合物预聚体发生聚合,得到光固定化辣根过氧化物酶电极。本发明利用聚丙烯酸酯的特性和良好的生物亲和性,制备光固定化辣根过氧化物酶电极。本发明制备的辣根过氧化物酶电极使用范围广,在水相、含水有机相和有机相中均对H↓[2]O↓[2]、有机过氧化物及氧气具有生物催化活性。该电极响应快,稳定性和重现性好,使用寿命长,准确度高,精密度好,测量范围宽。


应用单克隆抗体亲和吸附技术提取辣根过氧化物酶的方法:涉及辣根过氧化物酶提取纯化的方法,尤其涉及一种应用单克隆抗体亲和吸附技术从辣根中提取纯化辣根过氧化物酶的方法。应用单克隆抗体亲和吸附技术提取辣根过氧化物酶的方法,该方法采用针对辣根过氧化物酶具有高特异性和高亲和力的单克隆抗体与载体填料的藕联物,通过亲和层析的方法从辣根中提取、纯化辣根过氧化物酶。本发明采用单克隆抗体亲和吸附纯化HRP,不但节约时间,节约成本,而且不会产生很多废弃物,而且,与传统方法相比,酶的活性将大大提高,符合环境友好型和社会节约型社会建设需求。经此技术提取纯化的HRP产品质优价廉,将具有更强的市场竞争力,也符合技术发展对HRP越来越高的品质要求,因此,本发明将取代传统的沉淀纯化方法。

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